白浆在线_欧美日韩精品一区二区三区蜜桃_国产福利在线观看视频_姐姐在线观看动漫第二集免费_日韩在线看片_日韩草比

歡迎訪問杭州仟諾生物科技有限公司網站!
銷售咨詢熱線:
17758005454
產品目錄
您的位置: 網站首頁 >> 技術文章 >> 細胞培養和轉染

細胞培養和轉染

發布日期: 2019-08-30
瀏覽人氣: 1982

細胞培養和轉染 

1. 細胞培養(HEK293T) 
1) 顯微鏡下觀察細胞,細胞生長狀態良好,去上清; 
2) 加入預熱的PBS 3ml, 溫柔地清洗細胞,棄去PBS; 
3) 用胰蛋白酶消化細胞,通常75cm2 培養瓶的貼壁細胞用3ml 胰蛋白酶于37oC 
處理5min; 
4) 待細胞脫落后,加入5ml DMEM 培養液(含10%FBS)以終止消化反應,并將 
細胞懸液轉移入15ml 或50ml 離心管中; 
5) 1000rpm 離心5min,去除上清; 
6) 加入10ml DMEM 培養液(含10%FBS),重新懸浮細胞,使細胞充分打散; 
7) 進行細胞計數,(4 個大方格細胞數的均值×104 個為每ml 所含細胞數); 
8) 根據細胞計數結果,將適當數量的細胞懸液轉接入含有新鮮培養液的培養瓶 
或皿中;(第二天做轉染,A.Fugene6 法--細胞總量應達4-5×106 /10cm 培養 
皿; B. 磷酸鈣法: 細胞總量應達3×106 / 10cm 培養皿); 
9) 置于37 ℃ 5%CO2 的培養箱中培養 (注意培養箱應有足夠的水分)。 
注:以上所使用的胰蛋白酶、培養液等在使用前都置于37℃水浴中預熱,以減 
小對細胞的刺激。 
2. 細胞轉染 
2.1 脂質體介導的貼壁細胞轉染法 
以下針對293T 細胞、10cm 培養皿 
目前主要使用試劑盒為Roche 公司的FuGENETM6 Transfection Reagent 
1) 轉染前24 小時以4-5×106 /10cm 培養皿的細胞總量鋪板,當細胞生長狀態 
第三章 細胞培養和轉染 
18 
良好且貼壁細胞密度達到50~80%時即可進行轉染; 
2) 在1.5ml 離心管中加入需要共轉的2 種質粒DNA 各5μg,混勻。 
3) 將50μl FuGENE6 脂質體加入500μl DMEM(serum free)培養液(注意不要 
將FuGENE6 脂質體沾到管壁),加入前述DNA,輕輕混勻,RT 培養30 分 
鐘; 
4) 將含有DNA 和脂質體的液體小心加入到培養皿中,分散均勻,置于37 ℃ 5 
%CO2 的培養箱中培養24-48 小時。 
2.2 磷酸鈣介導的貼壁細胞轉染法 

分享到:
版權所有©2018 杭州仟諾生物科技有限公司 備案號:浙ICP備18056619號-1
  • 掃一掃,關注我們

主站蜘蛛池模板: 日韩精品成人av | 观看av | 天天影视综合 | 日日干夜夜操天天操 | 日本视频一区二区 | 日本公妇乱淫xxxⅹ 国产在线不卡 | 亚洲精品国产电影 | 国产成人精品视频在线观看 | www成年人视频 | 成人欧美一区二区三区1314 | 国产精品久久久久久久7777 | 成人在线看片 | 国产亚洲一区二区三区在线观看 | 国产精品久久久久久久7777 | 久久久久91 | 欧美日韩一区二区三区视频 | 玖玖玖在线 | 日本精品在线观看 | 日韩三区在线观看 | 国产成人久久精品 | 久久久91精品国产一区二区三区 | 自拍 亚洲 欧美 老师 丝袜 | 免费看a | 在线观看视频一区 | 狠狠伊人 | 日日干天天干 | 亚洲精品国产成人 | 亚洲成人免费电影 | 一级久久久久久 | 久久国产精品一区二区三区 | 国产精品国产a级 | 亚洲福利在线观看 | 一区二区国产精品 | 中文字幕av网 | 一级毛片中国 | 亚洲国产精品一区二区第一页 | 国产精品久久久久无码av | 国产偷录视频叫床高潮对白 | 亚洲福利在线观看 | 日韩免费视频一区二区 | 日韩成人av在线 |